摘要： 为探究粪肠球菌CylA基因对血脑屏障的影响，本试验选取粪肠球菌的CylA为目的基因，用PCR技术获取CylA基因片段与pMD@19-T Simple Vector过夜连接后转化至Dh5α中，经含Amp培养基筛选后进行PCR扩增并鉴定，对阳性菌株进行培养并提取其质粒，用酶BamhⅠ和酶XhoⅠ对提取的质粒和pcDNA3.1/Myc-his分别进行双酶切，将阳性质粒转染至鼠脑微血管内皮细胞中。采用实时荧光定量PCR和Western Blot技术对鼠脑微血管内皮细胞中CylA的表达进行检测及验证。结果显示，CylA全长约707 bp。重组真核质粒经双酶切后分别得到一条5500 bp和700 bp左右的条带。荧光定量结果显示，CylA基因42 h差异不显著（P＞0.05）|30、36、48 h差异显著（P＜0.05），且36 h的表达量最低。同时Western Blot也扩增出阳性条带。由此可知，粪肠球菌CylA基因可在鼠脑微血管内皮细胞中表达，并呈现先下降后上升的趋势。本试验为进一步研究其致病机制提供理论参考。
[关键词]粪肠球菌|CylA|荧光定量

关键词: 粪肠球菌, CylA, 荧光定量