● 摘要 测定乳猪胰脏、小肠内容物中淀粉酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶的活性以观察年龄对其影响。10头乳猪从21、28、35、42、49日龄分别被屠宰，乳猪在28日龄断奶。胰、小肠内容物中的淀粉酶，胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的总活性从21日龄至35日龄均呈逐渐上升趋势；35日龄后出现下降，断奶可能会造成多数消化酶的活性降低。但随着进食刺激则酶活会很快恢复并呈上升趋势。
● 关键词 断乳 猪 胰脏 淀粉酶 胰凝乳蛋白酶 胰蛋白酶
仔猪早期断乳是提高母猪的生产能力和规模化养猪业中的关键技术之一，但是早期断乳容易因消化能力较低而影响仔猪的生长发育。胃肠道的消化能力在猪的生长过程中起着极其重要的作用。但是，仔猪在3周前消化能力很有限，原因是消化道发育不成熟和消化酶分泌不足，只能靠母乳提供生长所需的营养物质。Bailezy 和Wood（1956）报道，仔猪消化淀粉的能力较差，21日龄前胰淀粉酶分泌很少，虽然乳糖酶的活性很高，但麦芽糖和蔗糖酶的活性很低。仔猪由母猪转变为含淀粉的日粮后，淀粉酶的活性提高，生长至8周龄淀粉酶的分泌量一直在增加。胰蛋白酶的活性在3周龄前较低，接近3周时迅速增大。根据乳猪消化道内各种消化酶活性的变化，合理配制早期断奶仔猪饲料将有利于仔猪的生长发育。
本试验的目的是研究乳猪断奶前后消化道中几种酶活性的变化，以确定合适的断奶周龄，为配合符合仔猪生理特点的日粮、加入外源酶强化仔猪料、提高饲料的消化率，改善仔猪生长速度提供理论根据。
1.材料和方法
1.1材料制备
随机抽取3、4、5、6、7周龄的乳猪各2只（公母各1只），集中屠宰。屠宰前允许其饮水、进食至少45分钟。样品采集制备依照Owskzy（1986）的方法稍经修改完成：开腹后立即结扎幽门瓣、回肓瓣、胰腺管，以防止样品相互污染；摘取胰脏，剥除脂肪组织和结缔组织；取含内容物的十二指肠一段，将其中的内容物刮出；样品放入液氮中速冻；加10倍体积预冷的乙酸酸化水（pH2.5）匀浆45秒；以27，000 × 4℃ 10分钟离心匀浆液，移出上清液，-70℃ 冻存备用。
1.2淀粉酶活性测定
依据Bernfeld 的方法进行，处理过程保持低温迅速完成。取对照试管和测试管各1只，加入制备的酶液1ml 及柠檬酸缓冲液（pH5.6）1ml 。在对照管内加入4 ml 0.4N NaOH溶液。两管在48℃水浴中保温15分钟后加入40℃预热的淀粉溶液2ml，摇匀，立即放入40℃水浴，准确保温5分钟后取出，向各测定管迅速加入4ml 0.4N NaOH以终止酶的活力。取其中溶液2ml，加入2ml 3.5棗二硝基水杨酸试剂，混匀，置于沸水浴，准确煮沸5分钟，取出冷却，用蒸馏水稀释至25ml，在520nm分光光度计下比色。
（а+β）=（B-B1）X
W×C 式中:
а+β淀粉酶总活性[麦芽糖（mg）/鲜重（g）/5分钟]；
B水解淀粉生成的麦芽糖量；B1对照管中麦芽糖量；X样品稀释倍数；W样品重（g）； C比色时所用样品液毫升数。
1.3胰蛋白酶活性测定
依照Schwert的方法修改后完成，底物为胰蛋白酶特异的N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯（BAEE,下同）。取2个石英比色杯（带盖，光程1ml），分别加入25℃ 预热2. 8ml BAEE-0.05M，pH8.0 Tris-HCl缓冲液（含CaCl2），在1比色杯中加入0.2ml 0 .05M pH8.0 Tris-HCl 缓冲液，混匀，作空白对照零点。在另一比色杯中加入0.2 制备的酶液，立即混匀并计时，在253nm 处测定光密度增加值，待增值趋平即停止。其中每30秒测定计录一次。根据时间棗光密度曲线的直线部分，依以下修订公式计算：
酶活单位（BAEE）= △Ｏ.Ｄ.t/ｔ×0.001
比活力=酶活单位数/g鲜重= △ＯＤt×1000/εＸｔ×0.001
1.4胰凝乳蛋白酶活性测定
依Hummel等（1959）的方法进行；底物为胰凝乳蛋白酶特异的N-乙酰-L-酪氨酸乙酯（ATEE，下同）。取2个石英比色杯，以一个色杯加0.05M pH7.0磷盐缓冲液调零，另一比色杯加2.80ml ATEE-0.05M pH7.0 磷酸盐缓冲液，0.20ml酶液，立刻混匀计时，于237nm处测定 О.Ｄ下降值，每30秒读数一次，持续3~5分钟。依修订公式及标准曲线计算
2 结果与分析
2.1胰脏淀粉酶活性的测定
胰脏淀粉酶活性的测定结果见表1。胰脏中淀粉酶的活性从21日龄到28日龄基本保持在500~600个酶活单位，上升的幅度不大。而从28日龄到35日龄时则有大幅度升高，从583.6个升高到1125.6个覆盖活单位，增加了近1倍。35日龄断乳后，42日龄的胰淀粉酶活性则又降至972.4个活性单位。这说明受断奶影响，淀粉酶活性有所下降。而49日龄的乳猪胰淀粉酶活性不仅恢复到35日龄水平，而且还略有增高，说明喂料刺激后，酶活性呈增加趋势。
2.2胰脏和小肠内容物胰糜蛋白酶活性
胰脏和小肠内容物胰糜蛋白酶活性见表2。胰脏中与小肠内容物中胰糜蛋白酶活性变化类似，但差异较大。自21日龄到35日龄活性增加，21日龄时胰脏匀浆的胰糜蛋白酶的活性是每克胰脏2750个单位，小肠内容物中的酶活性为每克小肠内容物 1000个单位。随着日龄的增加，到35日龄时两个部位的酶活性分别达到6700和2250 个活性单位。35日龄断乳后，胰脏和小肠内容物中的胰糜蛋白酶的活性急剧降低， 42日龄分别为4700，1325和49日龄分别为2550，1150个活性单位。
2.3胰蛋白酶在胰脏和小肠内容物中的酶活性变化
胰蛋白酶在胰脏和小肠内容物中
表1 周龄对胰淀粉酶活性的影响的酶活性变化列于表3。与胰淀粉酶 Table 1. Effect of week age on amylase activity
和胰凝乳蛋白酶的变化规律一样，胰 日龄 头数 胰脏匀浆物 Pancreashomogenates
脏中胰蛋白酶活性变化21日龄时为 Day No. (酶活性单位数/g)(Units/g)
2050个酶活单位。42日龄时则降低到 21 2 507.2
3000个酶活单位，与28日龄时一样。 28 2 583.6
49日龄时该酶的活性开始回复，达到 35 2 1125.6
3550个酶活单位。前35日龄小肠内 42 2 972.4
容物中胰蛋白酶活性略降，42、49日 49 2 1460.4
龄时持续上升。
3.讨论
Widdwson（1984）报道，在仔猪生长阶段，胃肠道组织的生长发育较快，10天内小肠的吸收面积增加1倍。在哺乳期，仔猪分泌充足的胰脂酶、乳糖酶和几种蛋白酶用于消化母乳。Cera（1990）对仔猪消化酶系统发育的研究表明，断奶的应激可引起仔消化道中各种酶活性的下降；实际上胰腺内消化酶的活性亦降低，可见断奶应激对胰脏组织的发育有一定的影响。可能的原因，一方面是消化酶合成和分泌环节受到了影响，另一方面仔猪断奶前后的食物截然不同，需要的消化酶谱差异也较大。本试验得到的结果证明，断奶应激对仔猪的消化系统影响很大，所分析的3 种酶无论是在小肠内，还是在胰腺中，断奶后酶的活性下降幅度较大（见图1，2， 3，4，5）。随着日龄的增长仔猪消化道中的酶活性逐渐升高，但在第5周突然下降而从第7周开始回升。仔猪消化各种酶活性的变化表明，仔猪在3周龄前消化能力有限，由于酶分泌不足和消化道发育不成熟，不能充分利用植物来源的，日粮中必需含有大量的动物性来源的乳制品和优质鱼粉等。虽然3~8周龄是仔猪胃肠道和酶系统发育和高峰期，但是由于断奶应激导致仔猪的消化道、酶系统和免疫能力发生一系列的变化，短时间内消化能力受到了影响。许多研究得到了同样的结果， Lindemen（1986）报道，断奶1周龄后各种胰酶（胰脂酶、胰蛋白酶、胰淀粉酶和糜蛋白酶）活性均显著下降，除胰脂酶外其它酶在2周后恢复到断奶前水平。本试验的结果与之非常一致。第7周龄时胰淀粉酶、胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的活性回升到断奶前的水平；第7周以后胃肠道淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶的活性将进一步提高。从某种意义上讲，3周龄前断奶补料无实际意义，而断奶仔猪日粮的可消化性比营养物质的含量多少更重要。鉴于早期断奶仔猪主要的消化酶明显不足和活性较低，加之早期断奶应激对消化酶活性增长的负面影响，近年来人们多主张在早期断奶仔猪料中加入外源酶强化饲料，以提高饲料的消化率，减少消化障碍的发生。 Collier和Hardy(1986)指出，在早期断奶仔猪饲料中使用中性的蛋白酶、а椀矸勖负挺聴葡聚糖酶的复合酶，显著地改善了仔猪早期断奶后的日增重和饲料效率。
