1 材料与方法
1.1 种毒。ＮＤ强毒:通过流行病学调查,对有典型临床病变的鸡进行病原分离,分离到Ⅶ型新城疫强毒株,可传代保存。ＮＤ弱毒:Ｌａｓｏｔａ毒株,由本实验室保存。
1.2 试验鸡和鸡胚:购自上海市农业科学院畜牧所鸡场。
1.3 主要试剂:10号白油(杭州炼油厂),司本-80(上海化学试剂公司),吐温-80(上海化学试剂公司),硬脂酸铝(上海天莲精细化工有限公司),甲醛溶液(上海溶剂厂)。
1.4 抗原制备:将鸡新城疫强毒接种于9日龄鸡胚,按常规方法接种和收获尿囊液,测定其ＥＬＤ50达10-7,ＨＡ∶210作为抗原1;将Ｌａｓｏｔａ株种毒接种于9日龄鸡胚,按常规方法接种和收获尿囊液,测定其ＥＬＤ50达10-6.5,ＨＡ∶210作为抗原2。
1.5 混苗:将收获的鸡新城疫强毒尿囊液及Ｌａｓｏｔａ尿囊液用千分之二甲醛溶液灭活,抗原1和抗原2以1∶1比例混合。将96份灭活胚液再加4份灭菌吐温-80作为水相;将6份司本-80、94份10号白油混合后,再加硬脂酸铝2份作为油相,油相3份和水相1份混合搅拌乳化。
1.6 疫苗物理性状检测。外观检测:观察外观。稳定性检测:在37℃条件下放置21天观察。粘度检测:用1ｍｌ吸管吸取37℃左右疫苗1ｍｌ(吸管内径为1.2ｍｍ)令其垂直自然流出,观察流速。
1.7 疫苗无菌检测:将制备的乳剂随机抽样,接种本品1ｍｌ于ＴＧ培养液,37℃培养72小时后,吸取0.2ｍｌ培养物分别接种于ＴＧ、ＧＡ试管各2支,各取一支置37℃、另一支置25℃;另取0.2ｍｌ培养物接种一支ＧＰ试管,置25℃培养5天,观察培养情况。
1.8 疫苗的安全性测定:取30日龄健康易感鸡6羽(ＨＩ≤4),各颈部皮下注射1ｍｌ,观察14天。
1.9 疫苗的免疫效力检验:取30日龄健康易感鸡10羽(ＨＩ≤4),各颈部皮下注射20μｌ,21～28日后,连同条件相同的健康5羽,各肌肉注射ＥＬＤ达10-5强毒,观察14天。
2 结果
2.1 油乳剂复合灭活苗的物理性状检测:外观检测为白色乳剂。稳定性:在37℃条件下放置21天不破乳。粘度检测:在内径1.2ｍｍ吸管中8秒钟以内流出0.4ｍｌ。
2.2 油乳剂复合灭活苗的安全性:试验鸡每羽颈部皮下注射疫苗1ｍｌ,观察14天,均无不良反应,剖检鸡注射部位无异常,说明疫苗对试验鸡是安全的。
2.3 油乳剂复合灭活苗的免疫力:10羽免疫后的雏鸡,攻毒后全被保护,没有死亡,而条件相同的健康鸡攻毒后,14天内全部死亡。免疫鸡21天后采血清,测抗体,ＨＩ∶29。
3 讨论我单位研制的鸡新城疫复合灭活苗在试验中证明是安全有效的。但在养殖场,鸡新城疫疫苗在免疫时应把灭活苗和活苗联合起来使用。灭活苗和活苗各有优缺点,结合起来使用,就可取长补短。灭活苗优点:注射后不是很快被吸收,而是在局部形成抗原库,持续释放抗原,不断刺激免疫应答,作用可达20天左右,灭活苗注射20余天,抗体就能积累到很高水平,形成坚强持久的免疫力,这是活苗所难以到达的。灭活苗的缺点是注射后抗原释放缓慢,每日释放量有限,加上死病毒主要刺激Ｂ细胞应答,对Ｔ细胞作用很弱,对Ｂ细胞应答不能提供足够的协助,因而灭活苗如单独使用,启动免疫应答力度就比较弱。活苗的特点是:活病毒刺激免疫应答有力,较快地形成免疫力。活毒的缺点是:体内作用时间较短,不易形成较高抗体,其作用还会受母源抗体与某些抗生素的干扰。因此,灭活苗和弱毒苗两者联合使用,这样开始活苗启动应答有力,随后死苗作用持久,即能形成较高水平的免疫力。
参考文献
〔1〕叶岐山,崔力兵,叶晴.禽病免疫原理与疫苗应用.安徽科学技术出版社,24～26
〔2〕陈晓清,彭丽英,赵本进.鸡新城疫-传染性支气管炎-减蛋综合症灭活苗的研制.上海畜牧兽医通讯,2002,2
