[摘要]紫外分光光度法使用应注意仪器的校正和检定,容量仪器及分析天平的检定,吸收池配对,溶剂要求,核对供试品吸收峰波长,狭缝宽度,称量，吸收池盛样体积方向性、洗涤等环节。
[关键词]紫外分光光度法；使用；注意环节
紫外分光光度法，是通过被测物质在紫外光区的特定波长或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析的方法。此法广泛应用于药品检测，因此，使用应注意以下环节：
1．仪器的校正和检定。由于温度变化对机械部分的影响，仪器的波长经常会略有变动，因此除应定期对所用的仪器进行全面校正检定外，还应于测定前校正测定波长。常用汞灯中的较强谱线237.83nm、253.65nm、275.28nm、296.73nm、313.16nm、334.15nm、365.02nm、404.66nm、435.83nm、546.07nm与576.96nm，或仪器中氘灯的486.02nm与656.10nm谱线进行校正，因钬玻璃在279.4nm、287.5nm、333.7nm、360.9nm、418.5nm、460.0nm、484.5nm、536.2nm与637.5nm波长处有尖锐吸收峰，也可作波长校正用，但因来源不同会有微小的差别，使用时注意。
吸收度的精度可用重铬酸钾的硫酸溶液检定。
2．所用的容量仪器及分析天平应经过检定，如有相差应加上校正值。
3．吸收池配对。石英吸收池对紫外光亦有吸收，1cm的吸收池在波长220-270nm的范围内，以空气为100%，其透光率往往小于100%，同时每个吸收池多少亦是不同的，故在每次测定前应做吸收池配对试验。方法取干燥洁净的吸收池，均装入测定用的空白溶剂，以一只吸收池作空白，用测定时所用的波长测定其他吸收池的吸收度，最后选择吸收最小的一只作为空白，测定并记录下其它吸收池的吸收度，供试品液的实际吸收度即应是与吸收池（有空白溶剂时）吸收度之差。
4．对溶剂的要求。测定供试品前，应先检查所用的溶剂在测定供试品所用的波长附近是否符合要求，并不得有干扰吸收峰；用1cm石英吸收池盛溶剂，以空气为空白（即参比光路不放置任何物质）测定其吸收度，在220-240nm范围内，溶剂和吸收池的吸收度不得过0.40，在241-250nm范围内不得过0.20，在251-300nm范围内不得过0.10，在300nm以上不得过0.05。每次测定时应采用同一厂牌，同一批号，混合均匀的1批溶剂。
5．测定时除另有规定外，应在规定的吸收峰±2nm以内，再测试几点的吸收度，以核对供试品的吸收峰波长位置是否正确，附另有规定外，吸收峰最大，波长应在该品种项下规定的波长±1nm以内，否则应考虑试样的同一性、纯度以及波长的准确度。
6．一般供试品溶液的吸收度读数，以在0.3-0.7之间为宜，吸收度在此范围误差较小。
7．仪器的狭缝宽度的选择，应以减小狭缝宽度时供试品的吸收度不再增加为准，对于中国药典紫外测定的大部分品种，可以使用2nm缝宽，但对某些品种如青霉素钾及钠的吸收度检查则需要1nm缝宽或更窄，否则其264nm的吸收度会偏低。
8．称量应按药典规定要求。配制测定溶液时稀释转移次数应尽可能少，转移稀释时所取容积一般应不少于5ml。含量测定供试品应称取2份，如为对照品比较法，对照品也应称取2份。吸收系数检查也应称取供试品2份，平行操作，每份结果对平均值的偏差应在±0.5%以内。作鉴别或检查可取样品1份。
9．取吸收池时，手指拿毛玻璃面的两侧。盛样品溶液以池体积的4/5为宜，使用挥发性溶液时应加盖，透光面要用擦镜纸由上而下擦拭干净，检视应无残留溶剂，为防止溶剂挥发后溶质残留在池子的透光面，可先用蘸有空白溶剂的擦镜纸擦拭，然后再用干擦镜纸拭净。吸收池放入样品室时应注意每次放入方向相同。使用后用洗涤剂及水冲洗干净，晾干防尘保存。吸收池如污染不易洗净时可用硫酸发烟硝酸（3：1V/V）混合液稍加浸泡后，洗净备用。如用铬酸钾清洁液清洗时，吸收池不宜在清洁液中长时间浸泡，否则清洁液中的铬酸钾结晶会损坏吸收池的光学表面，并应充分用水冲洗，以防铬酸钾吸附于吸收池表面。
10．供试品若为精制品，水分应另取样测定，扣除干燥失重。
