在对原料样品的检测中,一般有定性检测和定量检测。在定性检测中,使用的比较多的为显微镜检,包括直接镜检、分层镜检(用四氯化碳或三氯甲烷分层)、反应剂镜检(用化学物质和样品中的某些物质反应而在显微下区分)、染色镜检等。在使用的过程中,往往使用一项或多项镜检方法对样品中的物质进行判定。
对于非蛋白氮的检验,显微镜检是一种比较有效的方法。在对样品的检测中,一般使用的是生物显微镜,其放大的倍数在36~400倍之间,为了获得更好的显微效果,可以根据实际情况作出具体的调整。以下是镜检使用过程中的一些技巧:
一、直接镜检
直接镜检一般所用的倍数比较小,通过对样品不同的物理特征,如颜色、透明度、表面组织、形状等物理性状进行判定。特别的要与典型的样品进行比较,以便能够更好区分样品与杂质的不同。在直接镜检中,用不同的滤光片有时可以起到比较明显的效果。虽然直接镜检比较方便和直观,但有时对于样品中的物质很难区分时,可以用其它的检验方法。
二、分层镜检
将样品用四氯化碳进行脱脂和比重分离之后,样品与其它物质的区分会更加容易。对样品中的有机物和无机物分层之后,需在常温下干燥后再进行镜检。非蛋白氮一类的物质与原料的很多外观性质很不一样,通过两者的特异性之间的观察,可以对样品中是否掺有非蛋白氮一类的物质作出一个大概的判断。
三、反应剂镜检
用反应剂和样品进行反应,非蛋白氮一类的物质的化学性质和样品不一样,通过此种方法可以对样品中的非蛋白氮进行鉴别。经过四氯化碳分层之后,再与反应剂反应是比较好的一种方法。而镜检时在样品中加一滴或数滴浓硫酸,观察样品与浓硫酸反应的情况是一种比较直观的鉴别方法。因为无论动物蛋白还是植物蛋白,其与浓硫酸的反应速度和产生的现象比较明显。
四、染色镜检
用染色剂对样品进行染色,使样品中的植物或动物细胞染成不同的颜色,而非蛋白氮一类的物质则和样品的染色后的表现不同,通过此种方法使两者区分开来从而加以鉴别。以下是比较常用的染色方法:
1、对植物细胞的染色方法:番红——固绿染色法。取适量脱胎(视样品脂肪多少而定,可以用四氯化碳,也可以用丙酮,对于脂肪少的也可以不用脱脂)样品于烧杯中,用1%的番红水溶液浸泡l~3h水洗(去多余的染料)。将样品涂在玻片上,稍晾干。滴加 0.1%的固绿(溶剂用95%乙醇)。过15秒后滴加95%的乙醇,冲去多余固绿染料。待乙醇稍挥发后,加甘油液(甘油∶水=1∶1)浸润,加盖玻片。用生物显微镜检查。染色结果:细胞核,木质化细胞壁呈鲜红色,纤维素细胞壁、细胞质呈绿色。因为非蛋白氮没有细胞核、细胞质等结构,所以只要能够较好的掌握染色技巧,其对比效果比较明显。当然,不能从染色效果判断其一定为非蛋白氮。
2、对动物细胞的染色方法:苏木精——曙红对染法。取适量的脱脂样品于烧杯中,加入埃利希苏木精染色液浸泡3~5min,水洗数次(用5min左右)。将样品涂在玻片上,滴加氨水。3~4秒后立即满加水,洗1 min,稍晾一下,加 0.2%曙红水溶液浸润3 min,滴加95%的乙醇,洗去多余曙红染料。再稍晾一下,加甘油浸润,加盖玻片,用生物显微镜观察。其染色的结果为:细胞核呈蓝色,细胞质呈淡红色。通过此种方法染色,一般能够很容易的区分样品和非蛋白氮一类的物质。
为了能够更清晰的在显微镜下区分样品与杂质,也可采用以下方法(对于检验鱼粉一类的物质比较有效):先用四氯化碳或三氯甲烷对样品分层,除去无机物,必要时再用丙酮进行脱脂,再取一定量的样品置入蒸馏水中,搅拌,除去溶于水的物质,再用60目或80目的样品筛过滤,将样品放入50~60℃的烘箱中进行烘干(时间不能过长,以保持样品原来的状态),然后在显微镜下进行检验或再对其进行处理后镜检。
在显微镜检中,只能对非蛋白氮作初步判断。若要进一步的分析判断,还需进行定量分析检验。