1 仪器与试剂
仪器：HP1050高效液相色谱仪(含四元梯度泵)、可变波长检测器、自动进样器、恒温水浴箱、化学工作站。
预柱ODS Hypersil(5 μm，20×4 mm)；
分析柱ODS Hypersil(5 μm，125×4 mm)；
试剂：石油醚、甲醇、95 %乙醇、抗坏血酸、氢氧化钾、无水硫酸钠、维生素标样(均为Sigma产品)。除特殊规定外，所用试剂均为分析纯，水为重蒸水或相应纯度的水。
2 试样前处理
称取试样1.00～2.00 g，置于烧瓶中，加入0.5 g抗坏血酸、20 mL 95 %乙醇及5 mL氢氧化钾溶液(50 %)，置于80 ℃水浴中皂化30 min，皂化液用石油醚萃取，收集醚层并定容至50 mL，然后用水洗至中性，过无水硫酸钠柱备用。
取上述备用液适量，旋转蒸发器真空抽干，立即用甲醇定容，过滤，装瓶上机。标样同样处理。
色谱条件：维生素A、E测定：流动相甲醇∶水—98∶2；流速：1.2 mL/min；维生素A测定波长326 nm，维生素E测定波长292 nm；维生素D3的测定：流动相：甲醇∶水为92∶8；流速：1.2 mL/min；检测波长：265 nm。操作均应避光，流动相即配即用。
3 测定结果
3.1 试样前处理 1)萃取时使用石油醚，萃取效果更佳，且其沸点高于乙醚，在高温的夏季更为适用。2)萃取过程中，如发生乳化现象时，可加入少量无水乙醇。
3.2 色谱条件 1)波长选择：通过对维生素A、维生素E、维生素D3的紫外扫描，它们最大吸收波长分别为：325 nm、292 nm、265 nm。2)流动相的选择：将甲醇和水的五种不同配比流动相用于检测，发现甲醇∶水=98∶2时，对维生素A、维生素E的分离效果最佳；而加大水的比例，使甲醇∶水=92∶8时，可达到使维生素D3与杂峰分开的效果。3)维生素A、E、D3的标准液每次需经紫外分光光度计比色或扫描，按一定公式计算其准确含量。4)线性范围：VA：4.5 IU/mL～100 IU/mL r=0.9999；VE：1.5 μg/mL～50 μg/mL r=0.999；VD3：50 IU/mL～1500 IU/mL r=0.9999。5)准确度：分两个梯度将维生素标样添加到样品中，按本方法测定，得到回收率如表1。某多维产品测定结果与规格比较见表2。6)重复性：用本方法对同一多维预混料中维生素A、E、D3进行若干重复测定，结果见表3。
表1 回收率
| 维生素A | 维生素E | 维生素D3 |
| 93.62 %～108.38 % | 91.83 %～96.80 % | 92.90 %～106.34 % |
表2 测定结果与产品规格比较
| 维生素A | 维生素E | 维生素D3 | |
| 标示量(IU/kg) | 5.00×107 | 75 | 1.00×107 |
| 测定值(IU/kg) | 4.97×107 | 72.9 | 0.98×107 |
| 误差(%) | 0.60 | 2.73 | 2.00 |
表3 重复性
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | X | S | CV | |
| VA1.00×107(IU/kg) | 4.50 | 4.58 | 4.41 | 4.39 | 4.47 | 4.44 | 4.55 | 4.48 | 0.075 | 1.56 % |
| VE(g/kg) | 32.15 | 31.80 | 30.72 | 31.52 | 31.87 | 32.00 | 31.04 | 31.58 | 0.48 | 1.67 % |
| VD31.00×107(IU/kg) | 1.40 | 1.46 | 1.33 | 1.37 | 1.38 | 1.38 | 1.47 | 1.40 | 0.050 | 3.49 % |
