1、原种(一级斜面种子)的扩培
1.1菌种编号ZP-07为菜籽粕脱毒专用菌种,EP-09为棉籽饼粕专用脱毒菌种(酵母)
1.2斜面培养基的配制两个原种为同样的配方,取削皮去芽的土豆片或丝200克、麦夫50克、清水1000克,放入搪瓷杯中,文火加热到微沸,保持5分钟,用4层纱布过滤,挤干,滤液补水到1000毫升,加入白糖20克,琼脂20克,加热溶化,分装到18×180毫米试管中,塞上棉塞,包扎好,在110-125度的温度下灭菌45分钟,然后摆成斜面,凝固后即可使用。
1.3接种培养在无菌操作条件下,进行接种转管,30度左右培养,EP-07需要72小时成熟,长满浓厚的黄绿色孢子。EP-09约需要24--30小时成熟,长满浓厚结实白色菌苔。放入冰箱中,于4度左右保存,可保存3个月左右。
1.4保藏菌种的方法制作方法是:用10×100毫米的试管,装入消毒后的麦夫培养基,接种培养成熟,长满成熟后,进行保藏组装:取18×180的试管,装入约4厘米高的无水氯化钙(干燥剂),塞入厚约几毫米的一层棉花,以防止干燥剂滑动(起固定作用),再装入已长好成熟的10×10试管麦夫种,然后在大试管口,塞入橡皮塞,顶住里面的小试管使之固定,保证封好口后,再涂上一层蜡,即制作完毕,放入冰箱中保存。该保藏菌种具备干燥,隔氧,低温3大特点,故可以保存5年之久。
2、二级种子的制备
2.1培养基配方: EP-07:①豆粕45%,菜粕25%,麦夫30%。②豆粕40%,棉粕30%,麦夫30%。③豆粕70%,麦夫30%。 EP-09;①豆粕25%,棉粕15%,玉米面30%,麦夫30%。②豆粕25%,菜粕25%,玉米面30%,麦夫30%。配好粉料后,拌入1:0.8的清水,于甑中或灭菌柜中,以105度以上的温度的蒸汽蒸料45分钟,取出冷却,按每500克折干料接种一支斜面种的比例接入一级种子,接种方法为:取一支试管斜面种子,倒入适量的清水,用小铁丝等物件伸入试管中,刮下菌苔于清水中,然后再倒入料中,搅拌均匀,接种完毕。
2.2培养,烘干将料摊入搪瓷托盘中、或竹扁中、或编织篓等器具中,或直接摊料于干净的地板上,厚度约为2—3公分,再盖上一层湿纱布或干净报纸。于25—35度以内培养(30度最佳),到成熟为止。 EP-07需要72小时长成熟,长满黄绿色的孢子,有板栗香气,无夹心,长得透彻。 EP-09只需要24—30小时成熟,物料长成白色,很浓厚,有酵母菌特有的香气,无异味。长成熟后,于50度左右的温度下烘干,或太阳晒干,即为二级种子,置于阴凉爽干燥处保贮备用。
3、三级种子制作物料配方与二级种子的培养基配方相同,只是用做好的二级种子来接种,接种量为干料的1%。可以敞开培养,注意培养室保持干净,经常清扫,并定期用高锰酸钾或新洁尔灭,来苏尔等进行房间消毒,培养器具用过一次后要清洗,适当喷一些1%浓度的盐酸溶液,使器具保持一定的酸性,晒干后使用。培养成熟后的三级种子,低温烘干或晒干,立即包装入袋,密封严密,作为脱毒发酵剂使用或出售。
4、脱毒发酵技术
4.1菜粕脱毒配方为:菜粕90%,麦夫或玉米面10%,配料后加入1%的上述脱毒种子(脱毒剂或三级种子),加入80%的清水,拌匀,摊料于干净的竹扁、地板或其它器具上发酵,厚度3—4公分,30度左右发酵一天,不必烘干可以直接用于养殖,或烘干备用。
4.2棉籽饼脱毒配料为:棉籽饼粉80%,麦夫或玉米面20%,其余操作同上。
4.3大规模发酵可以考虑用塑料大棚发酵大棚发酵可能更适合于大型的养殖户,即搭建一个塑料大棚,以利于冬天保温,棚内搭设竹架子,可设5—6层,留过道,发酵时用竹扁装料,每扁5公斤左右,一层一层地放到架子上去,冬天可先用一个火炉放在棚内加温,待12小是后,撤掉火炉,靠物料本身的发热即可维持棚内温度在30度左右。
5、脱毒效果与经济效益我做的试验产品经农业部武汉油料及制成品监督检测中心测试,菜粕原料中各毒性物质含量为:硫代葡萄糖甙72μmol、异硫氰酸酯3676ppm、噁唑烷硫酮2342ppm。经发酵后:硫代葡萄糖甙未检出、异硫氰酸酯364ppm、噁唑烷硫酮179ppm。故而总的毒素含量才543ppm,即0.0543%,远低于欧洲共同体和我国粮油协会推荐的0.3%,和我国七五攻关建议的指标0.1%。发酵的成品的粗蛋白含量为40%,曲香浓厚,可替代饲料配方中一半的豆粕来使用,经济效益显著。两种发酵产品均含有丰富的维生素,消化酶活性和未知促生长因子,是畜禽鱼虾的优质蛋白原料。