摘要：试验选用28头体重11.74 ±
关键词：发酵饲料，大肠杆菌，生长性能，肠道菌群，血液生化参数，仔猪
前言
大肠杆菌K88是引起仔猪腹泻的重要因素之一，本试验旨在探讨发酵料对人工感染大肠杆菌断奶仔猪的保护力，探讨对生长性能、腹泻和粪便中微生物菌群及生理健康状况的影响。
1、材料与方法
1.1、试验动物及分组
选用28头体重11.74±
1.2、试验日粮
采用玉米-豆粕型基础日粮，日粮组成及营养水平见表1。试验组为发酵饲料添加组，对照组为抗生素添加组。仔猪发酵料为北京晟亚育达生物科技有限公司（前身为北京肉多多生物科技有限公司）研制；0.5%预混料1不含抗生素，0.5%预混料2含有抗生素，两种预混料由北京德宝群兴科贸有限公司提供。
表1 日粮组成及营养水平
原料
|
对照组，%
|
试验组，%
|
膨化玉米
|
20
|
15
|
玉米
|
34
|
33
|
去皮豆粕
|
10
|
9.4
|
膨化大豆
|
5
|
8
|
发酵豆粕
|
5
|
0
|
进口鱼粉
|
5
|
5
|
郁氏代乳粉
|
10
|
10
|
仔猪发酵料
|
0
|
10
|
豆油
|
1.4
|
2
|
葡萄糖
|
5
|
3
|
磷酸氢钙2水
|
1.3
|
1.3
|
石粉
|
0.8
|
0.8
|
食盐
|
0.3
|
0.3
|
蛋氨酸（98%）
|
0.27
|
0.27
|
赖氨酸（98%）
|
0.6
|
0.5
|
苏氨酸（98%）
|
0.2
|
0.2
|
酸化剂
|
0.3
|
0.3
|
甜味剂
|
0.03
|
0.03
|
抗氧化剂
|
0.03
|
0.03
|
防霉剂
|
0.03
|
0.03
|
氧化锌
|
0.26
|
0.26
|
氯化胆碱
|
0.08
|
0.08
|
0.5%预混料1
|
0.5
|
0.5
|
0.5%预混料2
|
0.5
|
|
|
|
|
营养水平
|
|
|
粗蛋白质
|
20.7
|
21
|
消化能，Mcal/kg
|
3.36
|
3.34
|
|
1.46
|
1.47
|
Met
|
0.58
|
0.54
|
Thr
|
0.85
|
0.77
|
Trp
|
0.19
|
0.17
|
Ca
|
0.8
|
0.8
|
P
|
0.6
|
0.6
|
注：每kg 0.5%预混料1提供维生素A，4400000IU；维生素D3，1500000IU；维生素E，16000IU；维生素K3，800mg；维生素B1，700mg；维生素B2，2400mg；维生素B6，1200mg；维生素B12，8.4mg；烟酸，145000mg；泛酸，5800mg；叶酸，400mg；生物素，70mg；氯化胆碱，
每kg 0.5%预混料2除了上述同样成分外，还含有牛至油
1.3、试验记录
试验猪只在试验开始、结束时记录其空腹体重；记录每栏猪饲料采食量。观察猪群采食情况、粪便形状和健康状况，记录仔猪腹泻情况。
1.4、试验设计
试验采用2´2因子设计，见表2。
表2 试验分组设计
项目
|
对照组
|
|
发酵料组
|
||
处理1
|
处理2
|
|
处理3
|
处理4
|
|
口服20 mL大肠杆菌K88（109）
|
不攻毒
|
攻毒
|
|
不攻毒
|
攻毒
|
试验开始后，于试验第7 d，用20 mL大肠杆菌K88培养液对处理2和处理4的猪进行口服攻毒一次，攻毒后第7 d，从猪前腔静脉采血，随后屠宰。
1.5、测定指标
1）、生产性能指标：于试验第1、14 d称取仔猪个体重，试验结束时结算饲料。根据体重、试验日期、饲料消耗量等参数计算平均日增重、平均日采食量和料肉比。
2）、腹泻指数：每天记录攻毒后仔猪腹泻时间、头数，计算腹泻指数。腹泻指数依据腹泻头次乘以相应腹泻得分计算，腹泻得分则根据表3腹泻评分标准查得
表3 腹泻评分标准
程 度
|
外 观
|
粪便中初水含量Moisture
|
评 分
|
正 常
|
条形或粒状
|
< 70
|
0
|
轻 度
|
软粪，能成形
|
70～75
|
1
|
中 度
|
稠状，不成形，粪水无分离现象
|
75～80
|
2
|
严 重
|
液状，不成形，粪水无分离现象
|
> 80
|
3
|
3）血液指标：在屠宰前1 h进行前腔静脉采血，测定血浆中葡萄糖、总胆固醇、尿素氮、谷草转氨酶、谷丙转氨酶、高密度脂蛋白胆固醇及低密度脂蛋白胆固醇含量。
4）肠道微生物指标：屠宰后分别采集回肠和盲肠食糜样品，用于测定其中大肠杆菌、总厌氧菌、耗氧菌和乳酸菌数量。
1.6、数据处理与统计
所有数据以重复为单位，采用SAS软件ANOVA程序中的2×2因子进行统计。
2、结果与讨论
试验结果，见表4，5，6和7。
从表4可见，发酵料对仔猪平均日增重影响不显著，但平均日增重呈上升趋势；发酵料组平均日采食量没有显著增加，在攻毒后对照组采食量显著高于其它几个组（P< 0.05）；第三处理组料肉比显著低于其它三个处理，而第一、二、四处理组间料肉比差异不显著。试验动物平均日增重呈上升趋势，原因可能是发酵饲料消化吸收率改善引起，若试验时间加长，日增重有可能有较大提高。
表4 发酵料对大肠杆菌攻毒后仔猪生长性能的影响
项目
|
常规料
|
发酵料
|
P值
|
|||
处理1（不攻毒）
|
处理2（攻毒）
|
处理3（不攻毒）
|
处理4（攻毒）
|
|
||
初重，kg
|
12.03
|
12.1
|
11.7
|
11.7
|
0.89
|
|
末重，kg
|
19.9
|
20.3
|
20.5
|
18.4
|
0.40
|
|
平均日增重，g
|
561
|
586
|
629
|
477
|
0.27
|
|
平均日采食量，g
|
833b
|
|
873b
|
801b
|
0.04
|
|
料肉比
|
|
|
1.42b
|
|
0.09
|
|
注：同行肩注不同字母表示差异显著（P< 0.1）。
由表5数据可见，常规饲料组攻毒引起仔猪腹泻，其指数为4.7，而发酵饲料组攻毒时仔猪腹泻指数为2.6，与不攻毒相比，攻毒引起猪只明显腹泻，但发酵料明显减少攻毒时仔猪腹。这表明，发酵饲料中含有的大量有益乳酸菌对仔猪消化道健康有很好的正向调节作用，它可以使大肠杆菌引起的腹泻大大下降。
表5 发酵料对大肠杆菌感染仔猪的腹泻的影响
项目
|
常规料
|
发酵料
|
|||
不攻毒
|
攻毒
|
不攻毒
|
攻毒
|
||
腹泻指数
|
0
|
4.7
|
0
|
2.6
|
|
由表6可见，采食发酵饲料的仔猪在大肠杆菌K88（109cell）攻毒后7 d其血浆低密度脂蛋白胆固醇含量极显著提高（P< 0.01）；发酵料和攻毒存在互作，两者显著地降低了血浆谷丙转氨酶的活性（P< 0.05）；但发酵和攻毒对其他血液生化指标没有显著影响。
表6 发酵料对大肠杆菌攻毒后仔猪血清指标的影响
项目
|
常规料
|
发酵料
|
P值
|
||||
不攻毒
|
攻 毒
|
不攻毒
|
攻 毒
|
对照vs发酵
|
攻毒vs不攻毒
|
两者互作
|
|
葡萄糖（mg/dL）
|
220.05
|
205.05
|
264.48
|
234.33
|
0.11
|
0.73
|
0.30
|
胆固醇（mg/dL）
|
70.25
|
75.00
|
73.75
|
89.25
|
0.10
|
0.31
|
0.06
|
尿素氮（mg/dL）
|
14.25
|
14.75
|
13.25
|
18.25
|
0.47
|
0.21
|
0.13
|
谷草（U/L）
|
90.63
|
98.08
|
99.20
|
78.20
|
0.73
|
0.39
|
0.68
|
谷丙（U/L）
|
62.70
|
51.05
|
56.18
|
34.53
|
0.09
|
0.44
|
0.02
|
高密（mg/dL）
|
28.25
|
30.95
|
28.23
|
33.18
|
0.50
|
0.49
|
0.03
|
低密（mg/dL）
|
43.43
|
48.15
|
71.98
|
72.32
|
< 0.01
|
0.67
|
0.71
|
从表7可见，发酵饲料可显著提高仔猪小肠乳酸菌数量（P< 0.1）；但对其他菌群如厌氧菌、耗氧菌和大肠杆菌等影响不大。这表明，发酵饲料可明显改善仔猪小肠微生物区系平衡，使有益微生物，尤其是乳酸菌迅速增加，即发酵饲料可以直接有效地补充肠道中有益乳酸菌数量。
表7仔猪回肠和盲肠微生物菌群的变化（log CFU/g 湿重）
项目
|
常规料
|
发酵料
|
P值
|
||||
不攻毒
|
攻毒
|
不攻毒
|
攻毒
|
对照vs发酵
|
攻毒vs不攻毒
|
两者互作
|
|
回 肠
|
|
|
|
|
|
|
|
乳酸菌
|
6.32
|
5.83
|
7.51
|
6.78
|
0.07
|
0.28
|
0.83
|
总厌氧菌
|
6.90
|
6.83
|
7.22
|
6.61
|
0.92
|
0.48
|
0.56
|
大肠杆菌
|
4.00
|
4.35
|
3.36
|
4.13
|
0.39
|
0.66
|
0.27
|
耗氧菌
|
7.86
|
7.66
|
8.88
|
7.85
|
0.58
|
0.56
|
0.81
|
盲 肠
|
|
|
|
|
|
|
|
乳酸菌
|
6.62
|
6.45
|
7.21
|
6.59
|
0.38
|
0.59
|
0.35
|
总厌氧菌
|
6.75
|
6.89
|
7.03
|
7.02
|
0.64
|
0.89
|
0.86
|
大肠杆菌
|
4.16
|
4.85
|
3.99
|
4.34
|
0.32
|
0.60
|
0.13
|
耗氧菌
|
8.00
|
7.74
|
7.87
|
7.22
|
0.50
|
0.36
|
0.69
|
3、小结
发酵饲料可使仔猪日增重有提高趋势，可显著改善仔猪料肉比，同时降低腹泻发生率；发酵饲料可改善仔猪小肠的微生物区系平衡程度，显著提高仔猪小肠乳酸菌数量。采食发酵饲料的仔猪在大肠杆菌K88（109cell）攻毒后7 d除血浆低密度脂蛋白胆固醇含量极显著地升高（P< 0.01）外，其它生化指标：如葡萄糖、尿素氮、谷草转氨酶、高密度脂蛋白胆固醇等变化不大，而血浆谷丙转氨酶的活性显著降低。
