鱼粉中掺入非蛋白氮化合物的检测

　　1、 鱼粉中掺入铵盐、尿素的检测

　　铵盐一般均含氨态氮。尿素在碱性条件下经脲酶催化也可生成氨态氮。奈氏试剂可与氨态氮反应生成棕 红色胶体络合物，并可依红棕－红褐－深红色的颜色变化，判断其掺入量的多少。

　　（1） 奈氏试剂法：取被检鱼粉1～2克加入250毫升烧杯中，加蒸馏水25～50毫升，混合均匀后静置20分钟，以便掺入的铵盐或尿素充分溶入水，备用。

　　另取试管一支，加奈氏试剂2毫升（称碘化钾5克加入5毫升蒸馏水中，边搅拌边滴加25％氯化汞饱和液至稍有红色沉淀出现。再加40毫升50％NａＯＨ溶液，最后用蒸馏水稀释至100毫升，混匀入棕色试剂瓶中保存）。然后沿管壁用滴管加上述被检样浸出液1～2滴，液面立即出现棕红色环，表明有铵盐掺入。若液面出现白或黄色环，可疑有尿素掺入，再用脲酶法进行进一步检测。

　　（2） 脲酶法

　　① 取10克被检鱼粉于烧杯中，加100毫升蒸馏水搅拌、过滤，取滤液少许于点滴板上，加2～3滴甲基红指示剂（0.1克甲基红溶入100毫升95％乙醇中），再滴加2～3滴脲素酶溶液（0.2克脲素酶溶入100毫升95％乙醇中）.在40～50℃水浴上加热1～2分钟，静置5分钟。若点滴板上呈深红紫色，说明鱼粉中掺入了尿素。

　　无脲素酶时，可用下法检测。取两份1.5克被检鱼粉入两支试管中,其中一支加入少许黄豆粉,然后两管各加入5毫升蒸馏水,摇匀后置60～70℃恒温水浴锅中3分钟，再滴加2～3滴甲基红指示剂。若加生黄豆粉的试管中呈较深紫红色，说明鱼粉中掺入了尿素。

　　②称取被检鱼粉2～3克加入250毫升三角瓶中，加蒸馏水100毫升，黄豆粉滤液20毫升（5克生黄豆粉人100ml水中浸泡lh，过滤），加塞摇匀。置40-45℃水浴锅内温热30min（温度不宜超过45℃，否则脲酶失活）、最后用镊子取红色石蕊试纸一条浸人该溶液中，若试纸变蓝；表明被检鱼粉掺有尿素。

　　（3） 定量法。取一个500ml烧瓶置可凋温电炉上，用玻璃管，皮管连接冷凝管，冷凝管口浸人滴有 3 滴甲基红一溴甲酚绿指示剂和 50ml l％的硼酸接收液中，接通冷凝水，此即定量检测的蒸馏装置。

　　然后将怀疑掺有尿素的样本液快速无损地倒人烧瓶中（三角瓶用蒸馏水冲洗3次，使所有残液、残渣全部人烧瓶中），并加蒸馏水至烧瓶1／2处。加热瓶内溶液至沸腾后调低电炉温度，使溶液保持沸而不溢状态。当蒸馏出瓶内溶液1／3后，用红色石蕊试纸蘸一下冷凝管口的馏出液，若试纸不变色，停止蒸馏。用标准的HCI溶液滴定接收液呈灰红色即为终点。根据所耗HCI毫升数即可计算出试样中掺人尿素的百分含量。

　　试样中尿素含量％＝0.03*V*N/W V一滴定所耗标准HCI液毫升数 N-HCI标准液的实际当量浓度 W一试样重量 0.03一尿素含氮相对V、N的比值。

　　（4） 格里斯试剂法。该法原理是在酸性条件下尿素与亚硝酸钠作用，产生黄色反应。若无尿素，则亚硝酸钠与对氨基苯磺酸发个重氮反应，其产物与a一萘胺起偶氮作用，呈紫红色。 检测方法： 取被检鱼粉 1克人烧杯中；加 20ml蒸馏水混匀，静置 20min。取上清液 3ml人 50ml三角瓶中，加 1％亚硝酸钠液 lml、浓 H2SO41ml，摇匀后静置 5min、待泡沫消失后，加格里斯试剂（酒石酸89克，对氨基苯磺酸10克，α一萘胺1克，混匀研碎，置棕色瓶保存）0.5g，摇匀．显黄色说明被检样掺有尿素，显紫红色说明未掺。

　　2、 鱼粉中掺入双缩脲的检测

　　该法依据双缩脲在碱性介质中可与Cu2+结合成紫红色化合物的原理，检测鱼粉中是否掺有双缩脲。

　　检测方法：

　　称取被检鱼粉2g入20ml蒸馏水中，搅拌均匀后静置10min，用干燥滤纸过滤。取滤液4ml入试管中，加 6mol／LNaOH溶液 1ml，再加 1.5％CuSO4液 lml，摇匀后立即观察，溶液显蓝色表示未掺，显紫红色说明掺有双缩脲，且颜色越深，掺人比例越大。